Logo uz.boatexistence.com

Xloroplastlarni buferdan ajratishning eng yaxshi usuli qanday?

Mundarija:

Xloroplastlarni buferdan ajratishning eng yaxshi usuli qanday?
Xloroplastlarni buferdan ajratishning eng yaxshi usuli qanday?
Anonim

Pigmentlarni ajratib olish uchun xloroplastlar izolyatsiya buferida to'xtatiladi. Xloroplastlardan pigmentlarni ajratib olish uchun avval buferdan xalos bo'lishimiz kerak. Xloroplastlarni buferdan ajratishning eng yaxshi usuli qanday? ajratish uchun sentrifugadan foydalaning

Xloroplastni qanday ajratish mumkin?

Xloroplastlarni izolyatsiyalash usulida hujayra devori blender yoki gomogenizator yordamida mexanik ravishda buziladi. Keyin buzilmagan barg to'qimalari va hujayra qoldiqlari filtrlash orqali chiqariladi. Xloroplastlar perkol gradienti yordamida sentrifugalash orqali yig'iladi.

Xloroplast izolyatsiyasi buferini qanday qilish mumkin?

2X bufer zaxirasini 1:1 nisbatda dH2O suv bilan suyultirish orqali kerakli miqdorda 1X Xloroplast izolyatsiyasi buferini tayyorlang 1X Chloroplastning mliga 10 µL 10% BSA eritmasidan qo'shing Izolyatsiya buferi. Foydalanishdan oldin 1 ml xloroplast izolyatsiyasi tamponiga 1 mL DTT qo'shing. Bu buferni “Toʻliq bufer” deb belgilang.

Xloroplast izolyatsiyasi buferida nima bor?

DNK izolyatsiya buferi 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA va 1 mM DTT dan iborat boʻlgan. 8 ml DNK izolatsiyasi buferi, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanol va 30 µl Proteinaz K (10 mg/ml) bilan xloroplast pelletini 55°C da 4 soat davomida sentrifuga trubasiga soling.

Xloroplast izolatsiyasi protokolida ismaloq bargini homogenlashtirish uchun ishlatiladigan buferning pH qiymati qanday?

Ismaloq yaxshi xloroplastlarga boy va ular osongina ajralib chiqadi. Barglarni yorilib ketmasligi uchun 0,1 M fosfat buferi, pH 7,5 va 0,5 M saxaroza solingan sovuq blenderga solishingiz kerak.

Tavsiya: